自去年我們介紹了《美天旎（miltenyi）**磁珠細胞分選過程中常見的問題》以來，受到大量細胞分選用戶的關注和好評，為此，我們將近期廣大用戶咨詢或了遇到的問題總結為美天旎（miltenyi）**磁珠細胞分選常見問題（二），以饗讀者。同時我們，歡迎大家通過佰樂良成網站（www.foundxy.cn）和官方新浪微博（http://e.weibo.com/bjbllc/）進行提問。
1、 對細胞進行磁珠分選后，所要分選的目的細胞的陽性比率沒有變化或變化不大，為什么？
答：可能是抗體或protocol兩方面原因。
2、 很多文獻報道的磁珠分選和流式分選后細胞的活力是沒有差別的，不知數據是否合理？
答：一般來說，較好的磁珠分選和流式分選后細胞的活力是沒有差別的。
3、 磁珠分選所使用的磁珠相與流式分選所學抗體那個更經濟？
答：單從價格角度看肯定是使用流式分選更經濟，因為流式分選所用的抗體也比磁珠便宜。但我們還需要考慮到價格以外的其他因素，比如分選速度、實驗室條件是否能達到流式的無菌分選的要求等。
4、 美天旎的磁珠分選出來的細胞能直接做流式檢測嗎？
答：可以直接做流式檢測。
因為1、miltenyi的磁珠直徑只有50nm，比細胞小很多很多，不會影響細胞的光散射特性；另外，磁珠上沒有熒光標記，所以也不會影響流式中熒光的激發。2、miltenyi的磁珠分選中，要通過分選柱將磁場擴大1000倍，因此分選時只需很少的磁珠標記上即可將細胞留在磁場中。其實磁性標記只占用細胞表面抗原的20－30％的結合位點，不影響后面流式抗體再去結合細胞的。同時英愛根據細胞表達強弱來選擇流抗：一般情況下，細胞表達較強，磁珠占據抗原表位的20-50%左右（如2000個分子中占500個）剩下的50%以上的位點還可以結合流抗，這種情況用同一個克隆號的檢測抗體就能檢測到我們的目標marker的表達；但對于表達水平較弱（CD133，CD25，人CD117等）的marker，磁珠占據大部分位點，同一個克隆號的抗體無法再與同一個表位結合，只能選擇不同表位的流抗才能檢測到。針對biotin偶聯抗體的間標分選，我們也可以選擇偶聯熒光素的抗生物素抗體檢測，如CD25-biotin也可以用biotin-PE/APC檢測。對于這種弱表達的情況，建議大家選擇抗體*好是PE等強熒光素偶聯的。
5、 美天旎的磁珠與Dynal的分選器可以配套使用嗎？
答：不可以相互替換使用。因為Dynal的分選磁珠體積較大，*小的也在直徑1um，這種大體積的磁珠可以與磁場直接作用，但對細胞損傷大，而且容易在分選過程中刺激細胞而使其活化；而美天旎的磁珠只有50nm，這種體積小的磁珠需要通過分選柱放大磁場1000到10000倍進行分選（miltenyi磁性分選器是特制的，可以滿足磁場放大的需求），這樣即可以具有很好的細胞分選效果，又可以減少對細胞的損害，更重要的是美天旎這種小體積的磁珠不會活化細胞，對下游實驗不會產生影響。
6、 MACS相比FACS的優點：
1. 適合大批量的細胞分選，FACS分選速度相對而言要慢很多；
2.穩定性高，重復性強，而FACS由于機器運行時間長會導致參數漂移故而實際獲取得靶細胞陽性率會大大下降；
3.無須大型設備，普遍適合大多數實驗室的細胞分選工作；
4.操作簡單，無須專門的設備操作人員（FACS操作需要一定的經驗）。
7、 磁珠分選細胞注意事項：
1.待分選細胞中如有貼壁細胞，建議在分選前先貼壁培養去除，或者提高EDTA濃度；
2.抗體包被磁珠對死細胞常有非特異性結合。因而分選前去除死細胞；
3.新鮮分離骨髓細胞，先用膠原酶、DNA酶、胰酶聯合消化，可使細胞團塊解聚，從而提高分離效率。
4.上分離柱前，充分振蕩，混懸細胞，打散細胞團塊；
5.用分離柱分選，應用真空抽濾水，減少水中氣泡，使分離柱不被氣泡阻滯；
6.細胞懸液加入分離柱中時，應將滴管伸至底壁后加入，避免將細懸液沿管壁流入，使管壁殘流末分選細胞，以致后繼洗柱過程中，因疏忽末被洗下，*后導致純度不高。洗柱時，應在前次液體充分流盡后，再加洗液。
7.分選細胞量應根據說明書控制，不超量；
8.孵育時間和溫度應按說明書進行，延長孵育時間、提高溫度會增加非特異結合；
9.先用抗體阻斷Fc受體，可降低非特異性結合；